Вакцины против вируса гепатита В

Вирус гепатита В вызывает сывороточный гепатит (вирусная бо­лезнь печени). Исход ее трудно прогнозировать. У тяжелых и ослаб­ленных больных заражение происходит при переливании крови, че­рез шприцы, половым путем. До недавнего времени против этого ви­руса не было общедоступной вакцины. Он не размножается in vitro в культуре тканей. Размножение происходит только в организме боль­ного. Поэтому ранее единственным способом его получения было вы­деление вирусных частиц из крови больных людей, а единственной вакциной служили антитела, выделенные из сыворотки крови носите­лей вируса. Эти антитела использовались для пассивной иммуниза­ции больных с острой формой гепатита.

В плазме крови зараженных людей содержатся различные коли­чества частиц разного размера и формы: сферические и нитевидные частицы диаметром около 22 им, которые лишены ДНК и являются оболочками вируса; частицы Дэйна диаметром 42 нм (они встречают­ся реже) — представляют собой вирионы и состоят из оболочки и пуклеокапсида диаметром 27 нм, содержащего молекулы ДНК. Пре­параты очищенных нуклеокапсидов служат источником материала для приготовления вакцины, их иммуиохимические свойства интенсивно изучаются.

Вирус гепатита В относится к семейству гепадиавирусов. Его кап-сид имеет липопротеидиую природу, куда входит поверхностный Hbs-белок и Hbs-аитигеп (HbsAG). Вирусная оболочка, вероятно, состоит из бислоя липидов, содержащего димеры полипептидов, в которых имеются межмолекулярные и внутримолекулярные дисульфидиые связи, определяющие третичную и четвертичную структуру белка, а также антигенные и иммуногениые свойства HbsAG. Внутри вирио-нов содержится иуклеотид, образованный ядерным белком HbcAG. Плазма зараженных людей содержит также другой антиген — HbeAG. Вирусная ДНК включает 3 200 нуклеотидов и состоит из двух цепей, одна из которых длинная (L), с фиксированной длиной, другая — короткая (S), с изменяющейся длиной.

Передача вируса гепатита В в естественных условиях или в экс­перименте происходит только у шимпанзе и у человека. Его не удает­ся размножать в культуре ткани, а опыты с несколькими видами лабо­раторных животных оказались безуспешными. Таким образом, изуче­ние биологии вируса было затруднено его узкой специализацией. Его геном клонировали и вводили (весь или по частям) в линии клеток, после чего изучалась экспрессия генов. Так, в 1980 г. Дюбуа с колле­гами добился успеха при введении вирусной ДНК в I-клетки мы­шей. Они обнаружили, что вирусная ДНК интегрировалась в клеточ-ную ДНК ичто частицы HbsAG секретировались в культуральную среду без лизиса мышиных клеток. В 1981 г. Мариарти и его сотруд­ники создали гибридную молекулу ДНК, содержащую ДНК вируса


SV40 и фрагмент ДНК вируса гепатита В. При введении в клетки почек обезьян она обусловливала синтез частиц HbsAG. Клонирова­ние вирусной ДНК в клетках Е. coli и ее последующее введение в линии клеток млекопитающих позволили преодолеть часть трудно­стей, вызванных отсутствием системы in vitro для размножения ви­руса. С другой стороны, синтез HbsAG в прокариотических и эука-риотических клетках с использованием клонированной вирусной ДНК, вероятно, помог бы получить другие типы антигенов, возможно, более экономичные и безопасные при производстве вакцин. Так, Раттер (США) получил клетки дрожжей, образующих гликозилироваииый поверхностный антиген. Был получен также Hbc-белок, выделенный из вирусных частиц и синтезированный под контролем рекомбииаит-иой ДНК в бактериях. Этот белок защищал шимпанзе от последую­щей инфекции вирусом гепатита В. Использование техники реком-бииаитиой ДНК для получения вакцин — шаг на пути к разработке синтетических вакцин. Несколько групп исследователей синтезиро­вали иммуиогеиные пептиды, которые, возможно, послужат началом разработки синтетической вакцины против гепатита В. Это два цик­лических пептида, которые вводили мышам виутрибрюшишю, исполь­зуя различные адъюванты. Через 7 — 14 дней после иммунизации были выявлены антитела к поверхности вируса гепатита В.