Диагностические, профилактические и лечебные препараты. Тест-системыдля диагностики ВИЧ/СПИД методом ПЦР

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: налет со слизистых оболочек, кожные чешуйки из очага поражения, мокрота, мо­ча, спинномозговая жидкость, кровь и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.При исследовании пре­паратов используют окраску простыми методами, а также по методам Романовского—Гимзы, Грама и др. Грибы рода Can­dida хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. При необходимости исследуют нативные препараты. В нативных и окрашенных препаратах видны одноклеточные микроорганиз­мы круглой или овальной формы.

Микологическое (культуральное) исследование.Делают посев исследуемого материала на агар Сабуро или другие специаль­ные среды. Посевы инкубируют при 20 и 37 "С. Рост колоний начинается на 2—3-й сутки, и окончательное формирование происходит через 5—6 дней. Идентификацию грибов рода Can­dida проводят на основании морфологии клеток, типа фила­ментации и биохимических свойств (табл. 23.1.1). Важное диа­гностическое значение имеют многократные количественные посевы исследуемого материала. Нарастающее количество ко­лоний в посевах подтверждает диагноз.

Таблица 23.1.1. Таксономические признаки дрожжеподобных грибов родаCandida

C.albicans Крупные, Круглые, Мусо- КГ — КГ

круглые, сметано- toruloi-

овальные образные, des края ров­ные

C.tropicalis Оваль- Круглые, Мусо- » КГ » ■ —

ные, сметано- toruloi-

удлинен- образные, des

ные края ров-

ные или зубчатые C.krusei Удлинен- Круглые, Мусо- » — — • —

ные суховатые, toruloi-

неровные des края

Условные обозначения: КГ — образование кислоты и газа.

Во многих случаях возможна идентификация выделенной культуры с указанием только родовой принадлежности (Can­dida spp.).

Экспресс-методы диагностики. Иммунохимические исследования. Метод ИФ и другие серологические реакции применяют для обнаружения антигенов возбудителя в материа­ле.

Серодиагностика.Для обнаружения антител используют ре­акции агглютинации, РСК и др. Серодиагностика имеет ог­раниченное применение: нарастание титра антител в сыво­ротке крови при висцеральном кандидозе подтверждает диа­гноз.

• Микробиологическая диагностика дерматомикозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ чешуйки кожи, воло­сы, соскоб ногтевых пластинок.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.Для приготовления пре­парата на предметное стекло наносят каплю 10 % раствора

Рис.23.1.1. Дерматофиты в пораженном волосе.

а — Microsporum; б — Tricho­phyton; в — Achorion.

гидроксида натрия или спирта с глицерином, в которую поме­щают 2—3 подозрительных волоса, или несколько кожных чешуек. Препарат (со щелочью) осторожно подогревают над пламенем до появления белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли, не доводя ее до кипения. Затем каплю накрывают покровным стеклом и рассматривают под микро­скопом с объективом 8х и 40х.

При оценке результатов микроскопического исследования и дифференциальной диагностике учитывают следующие при­знаки (рис. 23.1.1).

Microsporum canis идр. (микроспория) — волос в фоллику­лярной части окружен "чехлом" из мозаично расположенных мелких спор гриба. Внутри волоса обнаруживаются фрагменты гриба и споры.

Trichophyton tonsurans (стригущий лишай) — локализация элементов гриба в патологическом материале может быть раз­личной. Споры гриба Trichophyton либо располагаются только внутри пораженного волоса, сплошь заполняя его содержимое (эндотрикс), либо несколькими слоями окружают волос снару­жи в виде чехла (эктотрикс), либо споры и мицелий находятся как внутри, так и снаружи волоса (эндоэктотрикс).

Trichophyton (Achorion) schoenleinii (фавус или парша) — в во­лосе обнаруживают полиморфные грибковые элементы. Наря­ду с тонким мицелием встречается мицелий широкий, состо­ящий из прямоугольных клеток. Часто наблюдаются споры круглой или прямоугольной формы, а также пузырьки воз­духа.

Epidermophyton floccosum (эпидермофития паховая) — эле­менты гриба содержатся в чешуйках кожи, где располагаются в виде толстых септированных ветвящихся нитей мицелия на­ряду со спорами многогранной формы.

Микологическое (культуральное) исследование.Проводят для установления родовой и видовой принадлежности возбудителя путем выделения чистой культуры гриба и изучения его био­логических свойств. Материал предварительно обрабатывают кислотами или антибиотиками. Затем делают посев на сахар­ный питательный агар, сусло-агар, агар Сабуро, овощные сре­ды (см. тему 4.1), куда добавляют антибиотики для задержки роста бактериальной флоры. Посевы инкубируют при 30 °С. В положительных случаях рост наблюдается на 3—5-е сутки в виде разнообразных колоний: гладких, морщинистых, мучнис­тых, пушистых, часто пигментированных. При микроскопии препаратов, приготовленных из культур, хорошо заметен раз­витой, широко ветвящийся септированный мицелий. Органа­ми размножения служат споры, которые могут быть как внут­ренними (эндоспоры), расположенными внутри мицелия, так и наружными (экзоспоры), расположенными на концах или по сторонам нитей мицелия. Специальных органов плодоношения типа асков (сумок) у дерматофитов не обнаружено, что дало основание отнести их к несовершенным грибам — Fungi imper-fecti,

• Микробиологическая диагностика глубоких (системных) микозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мокрота, моча, пора­женные ткани, биоптаты кожи и лимфатических узлов, спин­номозговая жидкость и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Микроскопическое исследование.Обнаружение овальных дрожжевых или других тканевых форм грибов позволяет по­ставить предварительный диагноз. Иммунофлюоресцентный метод является наиболее эффективным способом выявления возбудителя в патологическом материале (см. ниже).

Микологическое исследование.Производят посев материала на среду Сабуро, кровяной агар и другие среды. Посевы инку­бируют в течение нескольких недель при 37 и 20 "С. Выделенные культуры идентифицируют на основании морфологических и

биохимических признаков. Грибы, вызывающие глубокие ми­козы, относятся к группе возбудителей ООИ, представляющих биологическую опасность IV степени (см. главу 11). Необхо­димо помнить, что лабораторная диагностика этих инфекций осуществляется только в специализированных лабораториях.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. При криптококкозе определяют антиген в спинномозговой жидкости и в сыворотке крови (у больных ВИЧ/СПИД) в динамике заболевания.

Молекулярно-биологические исследования. Ис­следуемый материал, полученный из очага инфекции, исполь­зуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Проводят для определения антител, кото­рые обнаруживаются в сыворотке крови через 2—4 нед после начала заболевания. Обычно используют РСК, РНГА, реакции иммунодиффузии, ИЭФ и др.

Кожно-аллергические пробы.Применяют для выявления со­стояния ГЗТ к соответствующим аллергенам.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты