Работа № 1. Определение содержания общего ХС в сыворотке крови

Принцип метода - основан на реакции Златкис-Зака. Холестерин при взаимодействии с хлорным железом в присутствии смеси серной, фосфорной и уксусной кислот образует окрашенный продукт, оптическая плотность его раствора пропорциональна концентрации холестерина.

Ход работы: В двух чистых пробирках приготовить растворы – опыт (оп) и стандарт (ст), как указано в таблице № 1.

Таблица № 1.

Реагенты Оп (мл) Ст (мл)
Стандартный р-р ХС - 0,2
Сыворотка крови 0,2 -
Уксусная к-та (лед) 3,0 3,0
Рабочий р-р FeCI3 2,0 2,0

 

Содержимое пробирок перемешать и инкубировать при комнатной температуре 15 минут, затем против воздуха определить оптическую плотность, используя зеленый светофильтр.

Расчет концентрации холестерина провести по формуле: СХС = ЕОПСТ . 1,29 ммоль/л (50 мг%)

Содержание холестерина ммоль/л: идеальное < 5,2; допустимое 5,2 – 6,5; патологическое > 6,5.

Клинико-диагностической значение: Исследование уровня ХС в сыворотке крови не даёт точной диагностической информации о конкретном заболевании, а лишь отражает патологию обмена липидов в организме. Его содержание исследуется для уточнения диагноза типа липидемии, а также для расчёта коэффициента атерогенности (см. ниже) и прогноза развития коронарного артериосклероза. Повышенный уровень ХС наблюдается при IIа, IIб, III типах липидемий, сахарном диабете, ожирении, алкоголизме, холестазе и др. Гипохолестеринемия - при голодании, синдроме мальабсорбции, гипертиреозе, онкологической кахексии, туберкулёзе, анемиях.

Вывод:

Работа № 2. Определение содержание ХС-ЛПВП в сыворотке крови.

Принцип метода: Добавление к образцу сыворотки крови осаждающего раствора – смеси фосфорновольфрамовой кислоты и MgCI2, приводит к осаждению всех липопротеидных фракций сыворотки крови, кроме ЛПВП. В полученном при центрифугировании супернатанте, определяется ХС-ЛПВП, аналогично общему холестерину.

Ход работы: В центрифужную пробирку внести 0,3 мл сыворотки крови и 0,6 мл осаждающего раствора, хорошо перемешать стеклянной палочкой и дать постоять 10 минут при комнатной температуре. Пробу центрифугировать при 4 тыс. об/мин. 8 минут, полученный прозрачный супернатант использовать для определения ХС-ЛПВП, как указано в таблице №1. Но вместо сыворотки крови исследовать супернатант.

Содержание ХС-ЛПВП в ммоль/л.

Нормальные величины: мужчины > 1,42; женщины > 1,68.

Группа риска: мужчины 0,9 – 1,42; женщины 1,16 – 1,68.

Патологические нарушения: мужчины < 0,9; женщины < 1,16.

Вывод:

Клинико-диагностическое значение.

Снижение содержания ХС-ЛПВП ниже, чем 1,42 у мужчин и 1,68 у женщин следует рассматривать как неблагоприятный признак, предсказывающий развитие атеросклероза и ИБС. При снижении концентрации с 0,91 до 0,78, т.е. всего на 0,13 ммоль/л, повышается риск развития ИБС в 3 раза. Таким образом, ХС-ЛПВП является очень чувствительным интегральным тестом, отражающим состояние обмена ЛП, и не зависит от изменения уровня общего ХС.

Снижение содержания ХС-ЛПВП наблюдается при ожирении, курении, избыточном употреблении в пищу углеводов, гиподинамии и, значительное снижение - при атеросклерозе, инфаркте миокарда, сахарном диабете, заболеваниях печени, липопротеинемии IV типа, болезни Танжи, дефиците ЛХАТ.

Повышение ХС-ЛПВП происходит под влиянием физических нагрузок, эстрогенов, пестицидов, алкоголя, но при его исчезновении из крови их уровень снижается до исходного.

В клинической практике для оценки атерогенности дислипопротеинемий пользуются расчетным коэффициентом атерогенности (КА).

 

КА = ХС общ. – ХС-ЛПВП / ХС-ЛПВП

 

В норме КА не должен превышать 3,5. В противном случае ставится диагноз - атеросклероз.

При нормолипидемии, чем ближе КА к верхней допустимой границе, тем выше вероятность развития атеросклероза. Таким образом, коэффициент КА позволяет выявлять клинические и доклинические стадии атеросклероза.

Исходя из полученных данных, рассчитайте коэффициент КА и сделайте по нему соответствующее заключение.

7. Контрольные вопросы по теме занятия.(см. задание к занятию № 16).

8. Литература для подготовки. ( см. задание к занятию № 16).

9. Обсуждено на заседании кафедры 29. 05. 2011 г.

10.Учебное задание подготовлено: доц. Трубачевым С.Д.

 

ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

кафедра биохимии

Утверждаю

Зав. каф. проф., д.м.н.

Мещанинов В.Н.

_____‘’_____________2011 г

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ



php"; ?>