К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 23

(для студентов)

Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический

Курс: 2

1. Тема занятия: Биохимия нервной системы и соединительной ткани.

2. Учебная цель занятия: Ознакомиться с особенностями химического состава и обмена веществ в нервной и соединительной тканях в норме и при патологии, биохимической диагностикой их основных патологических состояний.

3. Задачи занятия:

1. Получить представления:

· О химическом составе и обмене веществ в нервной ткани.

· Биохимических основах возникновения и проведения нервного импульса

· Обмене нейромедиаторов и механизмах синаптической передачи

· Биохимических причинах и механизмах возникновения патологических состояний в нервной ткани и их диагностике.

2. Изучить:

· Клеточный и химический состав соединительной ткани, особенности её организации и функционирования.

· Строение и обмен коллагена, эластина, фибронектина, протеогликанов, в норме в возрастном аспекте и при патологии (при заживлении ран, коллагенозах, недостаточности витамина С и др.)

· Роль биохимических маркеров в диагностике дегенеративных процессов в соединительной ткани.

4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.

5. Задание студентам:

1. Определение уровня сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином (по Свеннерхольму)

2. Качественный анализ аминокислотного состава желатина и яичного белка.

6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.

Работа № 1. Определение сиаловых кислот по реакции с резорцином (по методу Свеннерхольма).

Принцип метода. При кипячении гликопротеином плазмы крови с ТХУ отщепляются сиаловые кислоты, которые подвергаются мягкому гидролизу с образованием нейраминовой и уксусной кислот. Резорцин в присутствии солей меди дает с нейраминовой кислотой хромоген синего цвета.

Ход работы:

Сыворотку крови смешивают с 5% раствором ТХУ, ставят на 7 минут на кипящую водяную баню, затем охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр.
В пробирку помещают 1 мл фильтрата, добавляют 1 мл резорцинового реактива, закрывают фольгой и кипятят 15 минут на водяной бане. Охлаждают.
Добавляют 3 мл бутилацетата, встряхивают, отставляют на 15 минут для расслоения фаз.
Верхний окрашенный слой отделяют пипеткой и колориметрируют на ФЭКе с желтым светофильтром (длина волны 575-590 нм).
Для сравнения колориметрируют заранее приготовленный стандартный раствор нейраминовой кислоты, с концентрацией 40 мг%.
Расчет: С _опыт = Е _опыт/ Е _{стандарт} • 40 мг%,

Диагностическое значение: Содержание нейраминовой кислоты в крови увеличивается при деструктивных процессах в соединительной ткани: при инфаркте миокарда, остеомиелите, коллагенозах, туберкулезе, лейкемии, раковых опухолях и др. В норме содержание нейраминовой кислоты в сыворотке крови 62-73мг% или 2,00-2,36 ммоль/л. При туберкулезе ↑ до 178 мг%, при раковых опухолях в стадии распада – до 142 мл%. Кроме того, определение нейраминовой кислоты используется для характеристики динамики патологического процесса и эффективности лечения.

Снижение уровня нейраминовой кислоты может наблюдаться при патологических процессах сопровождающихся нарушениями биосинтеза белково-углеводных комплексов, при дегенеративных изменениях в печени, ЦНС, пернициозной анемии и др.

Работа № 2. Качественный анализ аминокислотного состава желатина и яичного белка.

Желатин – белковый материал, полидисперсная смесь полипептидов (М = 50-70 •10³) и их агрегатов (М = 300•10³). Образуется из коллагена при длительной обработке хрящей, костей, дермы кипячением в щелочи и экстракцией водой при температуре 50-100˚С. Сохраняет способность к образованию трехспиральной структуры коллагена и образует плотные коллоидные растворы – студни.

Принцип метода. С помощью качественных реакций обнаруживают аминокислоты, входящие в состав желатина и пептидную связь, присущую всем белкам.

Ход работы:

Таблица 1

Качественный анализ аминокислотного состава белков

Название реакции	Предмет обнаружения	Условия опыта	Изменение цвета	Результат
V р-ра белка	V реактива	Желатин	Яичный белок
Биуретовая	Пептидная связь	0,5 мл	Биуретовый 0,5 мл	Сине-розово-фиолетовый
Перемешивают при комнатной температуре
Нингидриновая	α-аминогруппы белков, пептидов	0,5 мл	Нингидрин 0,5 мл	Сине- или сине-фиолетовый
Нагревают до кипячения
Ксантотеиновая (Мульдера)	Ароматические аминокислоты (фен, тир, три)	0,5 мл	Конц. HNO₃ 5 капель	Желтый
Нагревают до кипения, охлаждают, по каплям добавляют раствор щелочи
Нитропруссидная	Серосодержащие аминокислоты	1 мл	Р-р щелочи 0,5 мл	Красно-фиолетовый
Кипятят, охлаждают
-	Нитропруссид 5 капель

Диагностическое значение: Качественные (цветные) реакции часто используются в клинико-биохимических исследованиях, фармацевтической практике для обнаружения присутствия белков, аминокислот в препаратах, подтверждения подлинности препарата, «проявления следов» аминокислот и белков при хроматографическом и электрофоретическом исследованиях.

Рекомендации по оформлению результатов работы написанию выводов.

Перенесите в лабораторную тетрадь таблицу №1 и отметьте в графе «результаты работы», какие качественные реакции для желатина и яичного белка дали положительные или отрицательные пробы.

7. Контрольные вопросы по теме занятия (см. задание к занятию).

8. Литература для подготовки (см. задание к занятию).

9. Обсуждено на заседании кафедры 18. 04. 2011 г.

10. Учебное задание подготовлено ст. преп. Каминской Л.А., асс. Гавриловым И.В.

ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

кафедра биохимии

Утверждаю

Зав. каф. проф., д.м.н.

Мещанинов В.Н.

_____‘’_____________2011 г

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ