Определение активности факторов протромбинового комплекса
Цели занятия:
-Усвоить представление одиагностическом значении определения факторов гемостаза.
- Знать определение гемостаза, виды и структурные компоненты гемостаза.
- Уметь определить активность факторов протромбинового комплекса (протромбиновое время и протромбиновый индекс) в исследуемой плазме.
Принцип: определяют время свертывания бедной тромбоцитами цитратной плазмы в присутствии оптимального количества кальция и избытка тромбопластина.
Это вариант определения времени рекальцификации плазмы с добавлением тканевого тромбопластина. В комплексе с фактором VII и Са он непосредственно активирует фактор X, так что результаты теста зависят от активности фактора VII и факторов включающихся в процесс свертывания крови на этапах тромбино- и фибринообразования (факторов II, V, VII).
Реактивы: Оборудование:
1. Раствор тромбопластина - 1%. 1. Термостат на 37 0С;
2. Раствор хлорида кальция – 0,025М; 2. Пробирки;
3. Хлорид натрия – 0,85%; 3. Дозаторы на 0,1 и 0,2 мл;
4. Плазма крови бедная тромбоцитами. 4. Секундомер.
Ход определения:
· Приготовить свежий раствор тромбопластина, для этого 50 мг тромбопластина помещают в центрифужную пробирку тщательно растирают с 5 мл воды до получения однородной суспензии, которую прогревают 30 мин на водяной бане, периодически перемешивая, затем центрифугируют 5 минут при 1000 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой в сухую пробирку и используют для реакции. Суспензию тромбопластина готовят каждый раз перед реакцией;
· Плазму разводят 0,85 % хлорида натрия в соотношении 1:1;
· В пробирку приливают 0.2 мл CaCI2 и 0.1 мл суспензии тромбопластина;
· Помещают пробирку в термостат при 370С на 30 секунд;
· Затем добавляют 0.1 мл разведенной плазмы, немедленно включают секундомер;
· Через каждые 15 секунд наклоняют пробирку на 45 градусов и отмечают появление нитей или сгустка фибрина.
Протромбиновая активность может выражаться в процентах по отношению к здоровому человеку-донору, тогда называется – протромбиновым индексом.
Протромбиновый индекс = (протромбиновое время здорового человека / протромбиновое время обследуемого) * 100%
В норме протромбиновое время 12-20 с;
протромбиновый индекс - 80-100%.
Клиническое значение:
Протромбиновое время характеризует механизм образования тромбокиназы (II фазу свертывания).
Удлинениепротромбинового времени (снижение протромбинового индекса) наблюдается при врожденной или приобретенной недостаточности факторов, отражающих функционирование внешнего механизма образования протромбокиназы, ее действие на протромбин и посдующее образование фибрина (I, II, V, VII, X). Обычно оно отмечается у больных принимающих антикоагулянты, при тяжелых поражениях паренхимы печени и недостатке витамина К(механическая желтуха, нарушения всасывания в кишечнике, кишечный дисбактериоз).
Задание для самостоятельной работы:
· Перепишите методику и клинико-диагностическое значение определения активности факторов протромбинового комплекса.
· Выполните практическую работу.
· Заполните бланк анализа.
· Сделайте выводы по работе и рисунки.
· Ответьте на дополнительные вопросы.
Ответьте на вопросы:
1. Кто является основоположником теории гемостаза?
2. Дать определение термину – гемостаз.
3. Назовите структурные компоненты системы гемостаза.
4. Дать характеристику первичному гемостазу.
5. Дать характеристику вторичному гемостазу.
6*. При участии, какого типа гемостаза происходит остановка кровотечения после прокола пальца скарификатором?
7. Сравните первичный и вторичный гемостаз, найдите основные отличия, оформите их в виде таблицы.
8. Опишите преаналитический этап исследования системы гемостаза.
Практическая работа
Определение содержание фибриногена гравиметрическим методом.
Цели занятия:
-Усвоить представление одиагностическом значении определения факторов гемостаза.
- Знать характеристику коагуляционного гемостаза, классификацию и характеристика факторов свертывания, фазы свертывания крови.
- Уметь определять содержание фибриногена в исследуемой плазме.
Принцип: количество образовавшегося фибрина эквивалентно содержанию фибриногена в плазме.
| Реактивы: 1. Раствор хлорида кальция – 5 % 2. Раствор тромбопластина – 1% 3. Плазма крови. | Оборудование: 1. Серологические пробирки. 2. Стеклянная палочка. 3. Секундомер. 4. Пипетки на 1 мл. 5. Дозатор на 0,1 мл. 6. Фильтры. 7. Весы торсионные. |
Ход определения:
· 1 мл плазмы без признаков гемолиза помещают в серологическую пробирку,
· Прибавляют 0.1 мл хлорида кальция и 0,1 мл тромбопластина.
· Содержимое перемешивают стеклянной палочкой, которую оставляют в плазме, включают секундомер и регистрируют время свертывания крови. В норме оно составляет 7-15 минут.
· Образовавшийся фибрин наматывают на стеклянную палочку при помощи фильтра. Фибрин снимают со стеклянной палочки и отжимают сыворотку, перемещая сгусток по фильтру при помощи стеклянной палочки. Так делают до тех пор, пока в проходящем свете на бумаге не исчезнут следы влаги.
· Высушенный фибрин немедленно взвешивают на торсионных весах.
В норме вес сгустка 9 - 15 мг или 2-4 г/л.
Для пересчета фибриногена в г/л вес сгустка умножают на 0.25
Клиническое значение:
Увеличение содержания фибриногена наблюдается при
· воспалительных процессах;
· злокачественных новообразованиях;
· туберкулезе.
Уменьшение содержания фибриногена наблюдается при
· паренхиматозных состояниях печени;
· после оперативного вмешательства;
· при ДВС-синдроме.
Задание для самостоятельной работы:
· Перепишите методику и клинико-диагностическое значение определения фибриногена в плазме крови.
· Выполните практическую работу.
· Заполните бланк анализа.
· Сделайте выводы по работе и рисунки.
· Ответьте на дополнительные вопросы.
Ответьте на вопросы:
1. Назовите основные структурные компоненты вторичного гемостаза.
2. Что такое факторы свертывания крови, их классификация?
3. Дайте характеристику плазменным факторам свертывания крови.
4. Дайте характеристику клеточным факторам свертывания крови.
5. Дайте характеристику тканевым факторам свертывания крови.
6. Дайте подробную характеристику Ф.I, II, IV, X, XII, XIII, Ф. 3, 8.
4*. Поэтапно опишите образование фибрина из фибриногена.
Практическая работа №