РАБОТА № 1. ТЕСТ ТОЛЕРАНТНОСТИ К ГЛЮКОЗЕ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Тест толерантности к глюкозе (нагрузка глюкозой или сахарная нагрузка) проводят с целью углубленного исследования углеводного обмена в организме человека при подозрении на недостаточную эндокринную функцию поджелудочной железы (скрытая форма сахарного диабета) или нарушение гликогенообразовательной способности печени.

ХОД ИССЛЕДОВАНИЯ. Натощак (утром, через 8-10 часов после приема пищи) забирают кровь из пальца (1-я проба). Пациент после этого (в течение 5 мин) выпивает раствор глюкозы в 200 мл воды, из расчета 1 г/кг массы тела (сахароза 1,5 г/кг). Через 30 минут от времени забора первой пробы забирают 2-ю пробу и через каждые 30 минут забирают пробы в течение 2,5 часа. На практике достаточно осуществлять следующий забор проб: натощак, затем через 30 минут, 1 час и 2 часа после нагрузки. В каждой из проб определяют концентрацию глюкозы и строят график, откладывая на оси ординат содержание глюкозы, а на оси абсцисс – время забора проб. Полученный график называется сахарная кривая.

У здоровых людей максимальное значение содержания глюкозы в крови наблюдается между 30-й и 60-й минутами. В норме оно не превышает 180 мг% (9,9 ммоль/л) и к 2-м часам снижается до исходного уровня. При нарушении утилизации углеводов сахарные кривые отличаются от нормальной.

ХОД РАБОТЫ.

На лабораторных занятиях необходимо провести определение содержания глюкозы в трех пробах крови, полученных от пациентов. Первая проба – кровь, взятая натощак; вторая – через 1 час после углеводной нагрузки; третья – через 2 часа после нагрузки. Методика количественного определения глюкозы изложена в работе «Количественное определение глюкозы в крови. Энзиматический (глюкозооксидазный) метод».

По результатам определения следует построить график и определить тип сахарной кривой.

РЕЗУЛЬТАТ:

ВЫВОД:

Дата: ________________

ЗАНЯТИЕ № 21

РАБОТА № 1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПИРОВИНОГРАДНОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Пировиноградная кислота (ПК) образуется в тканях организма в значительных количествах и является важным метаболитом углеводного обмена. Пути превращения ПК представлены на схеме:

ПРИНЦИП И ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА. ПК в щелочной среде реагирует с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ) с образованием 2,4-динитрофенилгидразона ПК, имеющего коричнево-красный цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации ПК.

ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки: контроль и опыт.

ПРОБА отмерить	ОПЫТ	КОНТРОЛЬ
Моча Н₂О КОН (25 % спиртовой раствор) Раствор 2,4-ДНФГ (0,1 %)	1,0 мл - 1,0 мл	- 1,0 мл 1,0 мл
Перемешать содержимое обеих пробирок одновременно, 1 минуту.
0,5 мл	0,5 мл
Перемешать, инкубация 15 минут при 18^оС ФЭК, синий светофильтр, кювета 5 мм Определяют экстинкцию против контрольной пробы.

РЕЗУЛЬТАТ: ΔЕ = .

Расчет проводят по калибровочному графику. Полученный результат (…… мкг) умножают на переводной коэффициент.

С = …. ·11,366 = мкмоль/сут.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

У здоровых людей при сбалансированном пищевом рационе за сутки с мочой выделяется 114-284 мкмоль (10-25 мг) ПК. Содержание ПК в крови в норме составляет 56,8 - 113,6 мкмоль/л.

Содержание пировиноградной кислоты увеличивается в крови и моче при авитаминозе и гиповитаминозе В₁, при сахарном диабете, сердечной недостаточности, гиперфункции гипофизарно-адреналовой системы.