Методика испытания противомикробной активности антисептика профилактического назначения. Гигиеническая антисептика

Цель:освоить методику испытания противомикробной активности антисептика профилактического назначения.

Материалы:

Стерильные чашки Петри – 8 шт., чашка Петри с 10-15 мл взвеси тест-культуры E. coli плотностью 10⁹КОЕ/мл., пробирки с 10 мл 1% пептонной воды – 8 шт., пробирки с 4,5 мл 1% пептонной воды – 32 шт., чашки с МПА – 8 шт., стерильные пипетки на 1-2 мл – 32 шт., пастеровские пипетки – 8 шт.

Методика:

I этап:

1. Вымыть руки теплой водой с туалетным мылом (2 минуты). Высушить руки на воздухе.

2. Контаминировать кожу 2-х дистальных фаланг указательного, среднего и безымянного пальцев одной руки взвесью E. coli плотностью 10⁹КОЕ/мл путем погружения на 10 сек. в чашку Петри с культурой. Высушить контаминированные пальцы на воздухе.

3. Провести смывы с контаминированных пальцев руки в чашке с 10 мл 1% пептонной воды путем втирания в дно чашки (контроль).

4. Выполнить обработку кожи рук антисептиком путем тщательного втирания 3 мл препарата в кожу в течение 30 секунд.

5. Провести смывы с контаминированных фаланг пальцев руки в чашке с 10 мл 1% пептонной воды путем втирания в дно чашки (опыт).

6. Выполнить посевы смывов (рис. 8).

0,5 мл смывной жидкости из чашки Петри перенести в пробирку с 4,5 мл 1% пептонной воды и далее приготовить разведения от 10^-1 до 10^-4.

Все разведения смывов посеять по 0,05 мл на соответствующие сектора чашек Петри с МПА.

II этап:

9. Подсчитать количество колоний на секторах чашек.

10.Определить концентрацию жизнеспособных бактерий (КОЕ/мл) в контрольных и опытных высевах и десятичные логарифмы числа выживших микробов.

Формула для определения концентрации жизнеспособных бактерий (КОЕ/мл):

N=n×20 ×10^x,

где: n – число колоний на питательной среде; 20 – коэффициент перерасчета посевного объема; 10^х – фактор разведения.

11.Рассчитать фактор редукции (разница между десятичными логарифмами КОЕ/мл в контроле и опыте).

Примеры расчета показателей:

Число колоний на секторе «10^-4» в контроле 5 шт., КОЕ/мл – N_к=5×20×10⁴=1 ×10⁶; десятичный логарифм – ln_к=6,0.

Число колоний на секторе «10^-1» в опыте 4 шт., КОЕ/мл – N_о=4×20×10¹=0,8×10³; десятичный логарифм – ln_о=3,9

RF (фактор редукции) = ln_к- ln_о= 6,0-3,9=2,1 ln

Значения десятичных логарифмов чисел определяются по таблицам или с помощью калькулятора.

Для гигиенической антисептики активность препаратов (величина фактора редукции) по отношению к тест-культуре E. coli должна составлять > 4,0 ln.

Чашка Петри со 0,5 мл 0,5 мл 0,5 мл

смывной жидкостью

0,5 мл 10^-1 10^-2 10^-3 10^-4

0,05 мл

МПА

Рис. 8. Схема выполнения посевов при испытании противомикробной активности антисептика профилактического назначения