Методические указания к практической работе. Продолжительность занятия: 3 академических часа (135 минут)
Продолжительность занятия: 3 академических часа (135 минут)
Место проведения занятия: учебная аудитория
Материально-техническое оснащение – таблицы, стенды, микроскопы, микропрепараты, вакцины
Хронометраж практического занятия:
1. Вводное слово преподавателя – 5 мин
2. Проверка исходного уровня знаний (тест-контроль) – 15 мин
3. Разбор теоретических вопросов по теме «Возбудитель дифтерии» – 40 мин
a. Морфология и культуральные свойства возбудителя дифтерии
b. Культурально-биохимические типы дифтерийных палочек
c. Дифтерийный токсин: механизм действия, методы выявления, определение токсигенности у возбудителя дифтерии
d. Микробиологический диагноз дифтерии
e. Специфическая профилактика и лечение дифтерии
4. Разбор теоретических вопросов по теме «Возбудитель коклюша» – 20 мин
a. Характеристика коклюшных и паракоклюшных бактерий
b. Эпидемиология коклюша
c. Патогенез коклюша
d. Лабораторная диагностика коклюша и паракоклюша
e. Специфическая профилактика коклюша
5. Выполнение практической работы – 35 мин
Практическая работа
C. diphtheriae
1. Изучение мазов из чистой культуры C. diphtheriae (зарисовать)
1.1. В мазке из чистой культуры, окрашенном щелочной метиленовой, видны скопления плотно прилегающих и тесно переплетенных между собой палочек, напоминающих войлок или пакет булавок. Палочки неравномерно окрашены благодаря содержащимся в них метахроматическим зернам волютина, которые чаще всего раположены на обоих концах палочек, окрашены в темно-синий цвет и резко контрастируют с бледно-синей цитоплазмой.
1.2. В мазке из чистой культуры, окрашенном по Граму, видны грамположительные палочки, расположенные в виде римской цифры V, попарно по углам друг к другу или в виде растопыренных пальцев.
1.3. В мазке из чистой культуры, окрашенном по Нейссеру, наиболее четко выявляются зерна волютина. Они окрашены в темно-синий, почти черный, цвет, располагаются чаще всего по полюсам полиморфных палочек, цитоплазма, которых окрашена в желтый или желто-зеленый цвет. Зерна волютина представляют собой запасы питательного вещества и обнаруживаются, как правило, у дифтерийных палочек, что позволяет дифференцировать их от ложнодифтерийных бактерий, которые, чаще всего, располагаются в виде частокола, зерна волютина у них расположены на одном из полюсов.
2. Изучение роста дифтерийных палочек на свернутой сыворотке (зарисовать)
Так как на простых средах возбудитель дифтерии не растет, для его культивирования используют среды, содержащие кровь или сыворотку. На свернутой сыворотке (среда РУ) выросли мелкие не сливающиеся между собой выпуклые колонии кремового цвета. Рост на свернутой сыворотке сравнивают с шагреневой кожей. Различить на этой среде дифтерийные и ложнодифтерийные бактерии невозможно.
3. Изучение роста C. diphtheriae на кровяно-теллуритовом агаре (зарисовать)
На средах, содержащих теллурит калия, дифтерийные палочки различаются по характеру роста, что связано с отношением их к определенному биовару.
Биовар gravis образует шероховатые колонии с серым или черным центром (за счет восстановления теллурита), бледно-желтой периферией, радиальной исчерченностью или цветка маргаритки (R-форма колоний) диаметром 2–3 мм плоские матовые.
Биовар mitis образует более мелкие (1–2 мм) черные, выпуклые, гладкие с блестящей поверхностью и ровным краем колонии.
Биовар intermedius образует мелкие (меньше 1 мм), выпуклые, гладкие или шероховатые, серовато-черные колонии (этот биовар встречается редко).
4. Изучение посевов на пестром ряду коринебактерий по таблице (записать в тетрадь табл.17)
Ферментативная активность изучена на жидких средах Гисса, содержащих, кроме питательной основы с добавлением сыворотки, 0,5% соответствующего углевода и индикатор Андреде. Кроме того, произведен посев на бульон с мочевиной и феноловым красным (при расщеплении мочевины среда приобретает красный цвет) и в столбик сывороточного агара с цистеином и ацетатом свинца для определения цистиназы (ферментация цистина). Через 20–24 часа среда по ходу укола чернеет, и на глубине, примерно1 см от поверхности, в среде появляется коричневое “облачко”. Такой рост характерен для C.diphtheriae. Коринебактерии могут образовать небольшое почернение среды по ходу укола (таблица 18).
Таблица 18